紫外吸收法
原理
大多數(shù)蛋白質(zhì)由于有酪氨酸和色氨酸的存在,在紫外光280nm有吸收高峰,可以進(jìn)行蛋白質(zhì)含量的測定.但是核酸在280nm也有吸收,干擾測定,不過核酸的最大吸收峰在260nm.Warburg等測定了酵母烯醇酶和酵母核酸在280nm和260nm時(shí)A的比值,然后通過計(jì)算消除核酸存在的影響,可以求得有核酸存在時(shí)蛋白質(zhì)的濃度.樣品不需要經(jīng)過預(yù)先處理,即可直接進(jìn)行測定.方法簡單而快速,又不損害樣品中的蛋白質(zhì),測定之后的樣品仍可作他用.樣品中有硫酸或其他鹽類存在也不影響測定.在柱層析分離酶或蛋白質(zhì)時(shí),常為人們所采用.
該方法是以酵母烯醇酶蛋白和酵母核酸為標(biāo)準(zhǔn)建立計(jì)算公式,而不同蛋白質(zhì)的氨基酸組成也不同,因而光吸收也不盡相同,這就會帶來誤差.