從以上你提供的線索來看應(yīng)該是模板溶解的問題,一般下游進(jìn)行PCR擴(kuò)增所用的DNA我們都是使用滅菌的雙蒸水溶解的,因?yàn)楫吘筎E中的含有一些化學(xué)物質(zhì)有可能對擴(kuò)增體系有影響的,而滅菌雙蒸水對擴(kuò)增肯定是沒有影響的.至于DNA講解的問題,反復(fù)凍融對DNA的損害是最大的,保存在滅菌雙蒸水中的DNA如果一直放在－20度的話保存半年是沒有問題的,在密集擴(kuò)增期間可以放在4度保存,也可以對DNA進(jìn)行分裝保存,每次拿出小體積的1支使用,可以避免反復(fù)凍融帶來的損壞.想要保存再長時(shí)間可以使用1倍的TE溶解,高濃度的沒有必要.
干粉引物在常溫下是可以長期保存的,相應(yīng)的－20和4度也是可以長期保存的,但是溫度不穩(wěn)定似乎對引物是有一定影響的,我也遇到過引物失效的問題,如果有懷疑直接重新合成就好了,畢竟時(shí)間成本最重要啊.
從SSR的擴(kuò)增來講,可以影響的因素太多,建議你從別人那里借個(gè)好使的DNA,使用自己的體系擴(kuò)增,如果擴(kuò)出來了,就能夠確定是模板問題了,如果擴(kuò)不出來,就有可能是你的體系中別的東西出了問題,做些調(diào)整總能克服的,找些參考文獻(xiàn)看看參照一下別人的體系也可以哦～