磷酸化是蛋白質(zhì)最重要的翻譯后修飾之一,磷酸化肽段和非磷酸化肽段的不同特性,使得磷酸化肽段和非磷酸化肽段的同步鑒定及定量成為蛋白質(zhì)組學(xué)研究中的難點(diǎn).生化與細(xì)胞所博士生伍一博等人在曾嶸研究員指導(dǎo)下,運(yùn)用該實(shí)驗(yàn)室發(fā)明的陰陽多維液相色譜-質(zhì)譜系統(tǒng)(Yin-Yang-MDLC-MS/MS)及在線pH梯度洗脫對細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)酶解肽段進(jìn)行分級分離,實(shí)現(xiàn)了一次實(shí)驗(yàn)中對磷酸化肽段和非磷酸化肽段的同步鑒定.進(jìn)一步結(jié)合穩(wěn)定同位素標(biāo)記 (SILAC)的方法,可以同步定量細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)表達(dá)及其磷酸化水平.對于單個(gè)蛋白質(zhì)而言,這一方法有助于區(qū)分兩種不同的磷酸化水平改變方式,即直接受激酶調(diào)控,或者通過蛋白質(zhì)表達(dá)量的變化而變化.從系統(tǒng)水平上看,這一方法可以揭示轉(zhuǎn)錄因子磷酸化對其下游靶基因的調(diào)控關(guān)系.該工作以脂肪細(xì)胞為研究對象,鑒定到了一些在分化早期磷酸化水平或表達(dá)量發(fā)生顯著變化的蛋白質(zhì),進(jìn)一步的生物信息學(xué)分析揭示了一些轉(zhuǎn)錄因子磷酸化水平與下游靶基因表達(dá)水平的關(guān)系.這一工作為系統(tǒng)水平上詮釋脂肪細(xì)胞分化早期分子事件提供了研究策略和實(shí)驗(yàn)依據(jù),發(fā)展的技術(shù)方法也可以廣泛應(yīng)用于信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子機(jī)制研究.