454的測序原理是什么?
454的測序原理是什么?
生物人氣:701 ℃時(shí)間:2020-04-16 09:42:50
優(yōu)質(zhì)解答
答:454測序原理:焦磷酸測序依靠生物發(fā)光進(jìn)行DNA序列分析的新技術(shù);在DNA聚合酶,ATP硫酸化酶,熒光素酶和雙磷酸酶的協(xié)同作用下,將引物上每一個(gè)dNTP的聚合與一次熒光信號釋放偶聯(lián)起來.通過檢測熒光信號釋放的有無和強(qiáng)度,就可以達(dá)到實(shí)時(shí)測定DNA序列的目的.此技術(shù)不需要熒光標(biāo)記的引物或核酸探針,也不需要進(jìn)行電泳;具有分析結(jié)果快速、準(zhǔn)確、靈敏度高和自動(dòng)化的特點(diǎn).\x0dRoche GS FLX System是一種基于焦磷酸測序原理而建立起來的高通量基因組測序系統(tǒng).在測序時(shí),使用了一種叫做“Pico TiterPlate”(PTP)的平板,它含有160多萬個(gè)由光纖組成的孔,孔中載有化學(xué)發(fā)光反應(yīng)所需的各種酶和底物.測序開始時(shí),放置在四個(gè)單獨(dú)的試劑瓶里的四種堿基,依照T、A、C、G的順序依次循環(huán)進(jìn)入PTP板,每次只進(jìn)入一個(gè)堿基.如果發(fā)生堿基配對,就會(huì)釋放一個(gè)焦磷酸.這個(gè)焦磷酸在各種酶的作用下,經(jīng)過一個(gè)合成反應(yīng)和一個(gè)化學(xué)發(fā)光反應(yīng),最終將熒光素氧化成氧化熒光素,同時(shí)釋放出光信號.此反應(yīng)釋放出的光信號實(shí)時(shí)被儀器配置的高靈敏度CCD捕獲到.有一個(gè)堿基和測序模板進(jìn)行配對,就會(huì)捕獲到一分子的光信號;由此一一對應(yīng),就可以準(zhǔn)確、快速地確定待測模板的堿基序列.
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