擴(kuò)不出來應(yīng)該是你的退火溫度的問題.用不用高保真酶的區(qū)別就在于會(huì)不會(huì)在延長(zhǎng)的時(shí)候出錯(cuò).
你可以做一個(gè)梯度PCR,如果還是沒有擴(kuò)出來的,那就是你的藥品問題了,buffer啊,dNTP啊,酶啊有問題、
PCR長(zhǎng)的目的片段需要注意什么
PCR長(zhǎng)的目的片段需要注意什么
我設(shè)計(jì)的引物溶解溫度是56.3和60.9度,相差有些大.我的目的片段大概3.7Kbp.我用的天根的Taq酶用通用的時(shí)間退火溫度56度P出來幾百bp的片段,然后又延長(zhǎng)退火時(shí)間到4分鐘改退火溫度為53度再P,結(jié)果什么也沒P出來.怎么辦?我在網(wǎng)上查了一下有說要用高保真酶LA Taq和invitrogen的Taq,我同學(xué)說我的第一步94度的時(shí)間4分鐘太長(zhǎng)了（不是30循環(huán)里的第一步）請(qǐng)問我應(yīng)該選擇什么試劑和什么反應(yīng)條件才能P出我的目的片段?
我設(shè)計(jì)的引物溶解溫度是56.3和60.9度,相差有些大.我的目的片段大概3.7Kbp.我用的天根的Taq酶用通用的時(shí)間退火溫度56度P出來幾百bp的片段,然后又延長(zhǎng)退火時(shí)間到4分鐘改退火溫度為53度再P,結(jié)果什么也沒P出來.怎么辦?我在網(wǎng)上查了一下有說要用高保真酶LA Taq和invitrogen的Taq,我同學(xué)說我的第一步94度的時(shí)間4分鐘太長(zhǎng)了（不是30循環(huán)里的第一步）請(qǐng)問我應(yīng)該選擇什么試劑和什么反應(yīng)條件才能P出我的目的片段?
其他人氣：698 ℃時(shí)間：2020-06-06 20:39:56
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