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  • 在用比色法檢測細胞活力實驗中可否用其他染料代替MTT

    在用比色法檢測細胞活力實驗中可否用其他染料代替MTT
    生物人氣:950 ℃時間:2020-05-22 06:54:48
    優(yōu)質解答
    我找到一個不一樣的方法,不知是否有幫助:
    MTT法
    MTT法又稱MTT比色法,是一種檢測細胞存活和生長的方法.其檢測原理為活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍紫色結晶甲瓚(Formazan)并沉積在細胞中,而死細胞無此功能.二甲基亞砜(DMSO)能溶解細胞中的甲瓚,用酶聯(lián)免疫檢測儀在490nm波長處測定其光吸收值,可間接反映活細胞數量.在一定細胞數范圍內,MTT結晶形成的量與細胞數成正比.MTT法已廣泛用于一些生物活性因子的活性檢測、細胞增殖測定、大規(guī)模的抗腫瘤藥物篩選、細胞毒性試驗以及腫瘤放射敏感性測定等.MTT法的特點是靈敏度高、價格經濟實惠.不過,MTT法是有缺陷的,是因為MTT經還原所產生的甲瓚產物不溶于水,需被溶解后才能檢測.這不僅使檢測時的工作量增加,也會對實驗結果的準確性產生影響,而且溶解甲瓚的有機溶劑對實驗者也有損害.

    CCK-8法(或稱WST-8法)細胞活性檢測方法簡介
    CCK-8細胞活性檢測試劑中含有WST-8,化學名:2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽],它在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯(1-Methoxy PMS)的作用下被細胞線粒體中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲瓚產物(Formazan).生成的甲瓚物的數量與活細胞的數量成正比.用酶聯(lián)免疫檢測儀在450nm波長處測定其光吸收值,可間接反映活細胞數量.該方法已被廣泛用于一些生物活性因子的活性檢測、大規(guī)模的抗腫瘤藥物篩選、細胞增殖試驗、細胞毒性試驗以及藥敏試驗等.CCK-8法的優(yōu)點: 1、使用方便,省去了洗滌細胞,不需要放射性同位素和有機溶劑; 2、CCK-8法能快速檢測; 3、CCK-8法的檢測靈敏度很高,甚至可以測定較低細胞密度; 4、CCK-8法的重復性優(yōu)于MTT法; 5、CCK-8法對細胞毒性??; 6、CCK-8細胞活性檢測試劑中為1瓶溶液,毋需預制,即開即用.CCK-8法的缺點: 1、與MTT法相比,CCK-8和XTT的價格比較貴. 2、CCK-8試劑的顏色為淡紅色,與含酚紅的培養(yǎng)基顏色接近,不注意的話容易產生漏加或多加.
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