DNA的離心原理
DNA的離心原理
我現(xiàn)在做提取純化宏基因組DNA,然我看了個文獻(xiàn),它里邊說“用六層紗布過濾獲得瘤胃液.1.隨后取350 μL瘤胃液,加1 mL PBS,離心3min(9,000 g,4℃),棄去上清(此步驟重復(fù)3次).
2.沉淀加1 mL PBS重懸后離心3 min(200 g,4℃).取上清至另一管中離心5 min(200 g,4℃),然后再取上清至另一管中,離心3 min(9,000 g,4℃).
3.棄去上清,加1 mL STE(0.2%去氧膽酸鈉,1%月桂酰肌氨酸鈉,5 mg/mL溶菌酶,pH8.0)重懸,離心3 min(9,000 g,4℃),3次.
4.棄去上清,用0.125 mL STE重懸.”我就很迷惑第一步驟的離心(9000g)是去除什么物質(zhì)?時間是怎么把握?這里的PBS有啥作用?第二步驟中離心(200g)中取了個上清液,是只得到了試驗用的微生物還是蛋白質(zhì)和微生物共同存在?還有再以9000g下離心到底去除什么物質(zhì)?第三步驟中加STE來離心,這樣做的目的?整個步驟中的重懸有啥作用? 請高手們給我個你們的寶貴的指點.在這求你們啦
我現(xiàn)在做提取純化宏基因組DNA,然我看了個文獻(xiàn),它里邊說“用六層紗布過濾獲得瘤胃液.1.隨后取350 μL瘤胃液,加1 mL PBS,離心3min(9,000 g,4℃),棄去上清(此步驟重復(fù)3次).
2.沉淀加1 mL PBS重懸后離心3 min(200 g,4℃).取上清至另一管中離心5 min(200 g,4℃),然后再取上清至另一管中,離心3 min(9,000 g,4℃).
3.棄去上清,加1 mL STE(0.2%去氧膽酸鈉,1%月桂酰肌氨酸鈉,5 mg/mL溶菌酶,pH8.0)重懸,離心3 min(9,000 g,4℃),3次.
4.棄去上清,用0.125 mL STE重懸.”我就很迷惑第一步驟的離心(9000g)是去除什么物質(zhì)?時間是怎么把握?這里的PBS有啥作用?第二步驟中離心(200g)中取了個上清液,是只得到了試驗用的微生物還是蛋白質(zhì)和微生物共同存在?還有再以9000g下離心到底去除什么物質(zhì)?第三步驟中加STE來離心,這樣做的目的?整個步驟中的重懸有啥作用? 請高手們給我個你們的寶貴的指點.在這求你們啦
生物人氣:182 ℃時間:2020-04-15 21:31:18
優(yōu)質(zhì)解答
9,000 g離心得到的是細(xì)胞碎片,微生物還有較少的雜質(zhì),蛋白質(zhì)被除去,大多數(shù)密度較小的雜質(zhì)被除去;200 g離得是雜質(zhì),上清液中是所要的細(xì)胞,微生物.需要反復(fù)離心純化.PBS具有鹽平衡、適宜pH緩沖作用,也就是對生物制劑有個保護(hù)作用.用STE是使微生物裂解釋放DNA,離心收集.重懸就是獲得液體環(huán)境,進(jìn)行下一步實驗.至于離心時間不是參考值,就是經(jīng)驗值,基本都是這樣吧.可以查一下細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)的離心參數(shù)
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