關(guān)于構(gòu)建表達(dá)載體
設(shè)計(jì)的PCR引物 F 5-GGA TCC ATA GTG AAG GCA GGA ATC ACA ATC-3、R 5-GCT CTT AGG CCA CAT GGT ,引物含BamHI/XbaI酶切位點(diǎn),P了DNA沉淀之后,將其連接到含EcoRI的pCRTM 2.1 上,再用BamHI/XbaI酶切后連接到表達(dá)載體上.我想問的是合成的雙鏈DNA起始部位（即BamHI/XbaI酶切位點(diǎn)之前）沒有EcoRI 位點(diǎn),它是怎么連接到含EcoRI的pCRTM 2.1 上的,謝謝!
設(shè)計(jì)的PCR引物 F 5-GGA TCC ATA GTG AAG GCA GGA ATC ACA ATC-3、R 5-GCT CTT AGG CCA CAT GGT ,引物含BamHI/XbaI酶切位點(diǎn),P了DNA沉淀之后,將其連接到含EcoRI的pCRTM 2.1 上,再用BamHI/XbaI酶切后連接到表達(dá)載體上.我想問的是合成的雙鏈DNA起始部位（即BamHI/XbaI酶切位點(diǎn)之前）沒有EcoRI 位點(diǎn),它是怎么連接到含EcoRI的pCRTM 2.1 上的,謝謝!
生物人氣：830 ℃時(shí)間：2020-05-27 08:52:56
優(yōu)質(zhì)解答
通過TA系統(tǒng)連接上的,因?yàn)镻CR末端有產(chǎn)物體A,而pCRTM 2.1 載體上有T,可以通過TA配對(duì)而構(gòu)建的.謝謝，我對(duì)這個(gè)不是蠻懂，還有一個(gè)疑問，就是，引物的5端不就是p出來的產(chǎn)物的5端嗎，既然引物5端都是GCT，那A是從哪兒來的呢，謝謝啊，初學(xué)，所以有些疑問。
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