這位是搞分子生物學(xué)的嗎?
DNA測(cè)序的方法有很多種. 目前最常見的是雙脫氧終止法了. 在測(cè)序用的緩沖液中含有四種dNTP及聚合酶. 測(cè)序時(shí)分成四個(gè)反應(yīng), 每個(gè)反應(yīng)除上述成分外分別加入2,3-雙脫氧的A, C, G, T核苷三磷酸(稱為ddATP, ddCTP, ddGTP, ddTTP), 然后進(jìn)行聚合反應(yīng). 在第一個(gè)反應(yīng)物中, ddATP會(huì)隨機(jī)地代替dATP參加反應(yīng)一旦ddATP加入了新合成的DNA鏈, 由于其3位的羥基變成了氫, 所以不能繼續(xù)延伸. 所以第一個(gè)反應(yīng)中所產(chǎn)生的DNA鏈都是到A就終止了; 同理第二個(gè)反應(yīng)產(chǎn)生的都是以C結(jié)尾的; 第三個(gè)反應(yīng)的都以G結(jié)尾, 第四個(gè)反應(yīng)的都以T結(jié)尾, 電泳后就可以讀出序列了. 也許這樣說你不一定明白. 舉一個(gè)例子, 假如有一個(gè)DNA, 互補(bǔ)序列是GATCCGAT, 我們?cè)囍鲆幌?
在第一個(gè)反應(yīng)中由于含有dNTP+ddATP, 所以遇到G, T, C三個(gè)堿基時(shí)沒什么問題, 但遇到A時(shí), 摻入的可能是dATP或ddATP, 比如已合成到G, 下一個(gè)如果參與反應(yīng)的是ddATP則終止, 產(chǎn)生一個(gè)僅有2個(gè)核苷酸的序列: GA, 否則繼續(xù)延伸, 可以產(chǎn)生序列GATCCG, 又到了下一個(gè)A了. 同樣有兩種情況, 如果是ddATP摻入, 則產(chǎn)生的序列是GATCCGA, 延伸終止, 否則可以繼續(xù)延伸, 產(chǎn)生GATCCGAT.
所以在第一個(gè)反應(yīng)系統(tǒng)中產(chǎn)生的都是以A結(jié)尾的片段:
GA, GATCCGA,
同理在第二個(gè)反應(yīng)中產(chǎn)生的都是以C結(jié)尾的片段:
GATC, GATCC,
在第三個(gè)反應(yīng)中產(chǎn)生的都是以G結(jié)尾的片段:
G, GATCCG
在第四個(gè)反應(yīng)中產(chǎn)生的都是以T結(jié)尾的片段:
GAT, GATCCGAT,
電泳時(shí)按分子量大小排列, A反應(yīng)的片段長度為2, 7; C反應(yīng)的為4, 5; G反應(yīng)的為1, 6; T反應(yīng)的為3, 8, 四個(gè)反應(yīng)的產(chǎn)物分別電泳, 結(jié)果為
87654321
A||
C||
G ||
T ||
我們可以從右向左讀, 為GATCCGAT, 至此, 測(cè)序完成(上面這個(gè)圖在百度知道中顯示不正常, 因?yàn)榘俣戎赖木W(wǎng)頁用的是比例字體, 你如果想看它, 拷貝到記事本中, 用等寬的字體來看).
不知你有什么不清楚的沒有? 我是搞分子生物學(xué)的, 歡迎討論