BJ5183細(xì)胞感受態(tài)的制備
BJ5183細(xì)胞感受態(tài)的制備
我之前用拿來的BJ5183菌液劃板挑單菌落,然后擴(kuò)大培養(yǎng)保存菌種.最近用該菌種用氯化鈣法制備感受態(tài)細(xì)胞然后用pShuttel-CMV轉(zhuǎn)染（連上了目的基因）,但是Kna板子上培養(yǎng)了進(jìn)2天的菌落非常少（疑似也就4-5個）,同時非常?。ù笮∫簿拖喈?dāng)于一個衛(wèi)星菌落）,這是什么原因?BJ5183感受態(tài)細(xì)胞的制備有什么特殊需要注意的嗎?
我之前用拿來的BJ5183菌液劃板挑單菌落,然后擴(kuò)大培養(yǎng)保存菌種.最近用該菌種用氯化鈣法制備感受態(tài)細(xì)胞然后用pShuttel-CMV轉(zhuǎn)染（連上了目的基因）,但是Kna板子上培養(yǎng)了進(jìn)2天的菌落非常少（疑似也就4-5個）,同時非常?。ù笮∫簿拖喈?dāng)于一個衛(wèi)星菌落）,這是什么原因?BJ5183感受態(tài)細(xì)胞的制備有什么特殊需要注意的嗎?
生物人氣：726 ℃時間：2020-10-01 21:24:06
優(yōu)質(zhì)解答
感受態(tài)細(xì)胞你先用穩(wěn)定濃度的高純質(zhì)粒測一下效率,如果達(dá)不到10的5次方就別用了.如果效率挺高有6或7次方而轉(zhuǎn)化子不多,那么就和你構(gòu)建的質(zhì)粒有關(guān)了.制備感受態(tài),一個要快,二要一直保持細(xì)胞在冷凍狀態(tài),所有epp管和槍頭都提前放在-80度冰箱冷凍.
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