操作步驟
1．稱量
按培養(yǎng)基配方比例依次準(zhǔn)確地稱取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入燒杯中.牛肉膏常用玻棒挑取,放在小燒杯或表面皿中稱量,用熱水溶化后倒入燒杯.也可放在稱量紙上,稱量后直接放入水中,這時如稍微加熱,牛肉膏便會與稱量紙分離,然后立即取出紙片.蛋白胨很易吸潮,在稱取時動作要迅速.另外,稱藥品時嚴(yán)防藥品混雜,一把牛角匙用于一種藥品,或稱取一種藥品后,洗凈、擦干,再稱取另一藥品,瓶蓋也不要蓋錯.
2．溶化
在上述燒杯中可先加入少于所需要的水量,用玻棒攪勻,然后,在石棉網(wǎng)上加熱使其溶解.待藥品完全溶解后,補(bǔ)充水分到所需的總體積.如果配制固體培養(yǎng)基,將稱好的瓊脂放入已溶化的藥品中,再加熱溶化,在瓊脂溶化的過程中,需不斷攪拌,以防瓊脂糊底使燒杯破裂.最后補(bǔ)足所失的水分.
3．調(diào)pH
在未調(diào)pH前,先用精密pH試紙測量培養(yǎng)基的原始pH值,如果pH偏酸,用滴管向培養(yǎng)基中逐滴加入1mol/L NaOH,邊加邊攪拌,并隨時用pH試紙測其pH值,直至pH達(dá)7．6.反之,則用1mol/L HCl進(jìn)行調(diào)節(jié).注意pH值不要調(diào)過頭,以避免回調(diào),否則,將會影響培養(yǎng)基內(nèi)各離子的濃度.
對于有些要求pH值較精確的微生物,其pH的調(diào)節(jié)可用酸度計進(jìn)行（使用方法,可參考有關(guān)說明書）.
4．過濾
趁熱用濾紙或多層紗布過濾,以利結(jié)果的觀察.一般無特殊要求的情況下,這一步可以省去（本實(shí)驗(yàn)無需過濾）.
5．分裝
按實(shí)驗(yàn)要求,可將配制的培養(yǎng)基分裝入試管內(nèi)或三角燒瓶內(nèi).分裝裝置見圖Ⅴ-1.
分裝過程中注意不要使培養(yǎng)基沾在管口或瓶口上,以免沾污棉塞而引起污染.
(1)液體分裝分裝高度以試管高度的1/4左右為宜.
(2)固體分裝分裝試管,其裝量不超過管高的1/5,滅菌后制成斜面,如圖Ⅴ-2.分裝三角燒瓶的量以不超過三角燒瓶容積的一半為宜.
(3)半固體分裝試管一般以試管高度的1/3為宜,滅菌后垂直待凝.
6．加塞
培養(yǎng)基分裝完畢后,在試管口或三角燒瓶口上塞上棉塞,以阻止外界微生物進(jìn)入培養(yǎng)基內(nèi)而造成污染,并保證有良好的通氣性能（棉塞制作方法附本實(shí)驗(yàn)后面）.
7．包扎
加塞后,將全部試管用麻繩捆扎好,再在棉塞外包一層牛皮紙,以防止滅菌時冷凝水潤濕棉塞,其外再用一道麻繩扎好.用記號筆注明培養(yǎng)基名稱、組別、日期.三角燒瓶加塞后,外包牛皮紙,用麻繩以活結(jié)形式扎好,使用時容易解開,同樣用記號筆注明培養(yǎng)基名稱、組別、日期.
8．滅菌
將上述培養(yǎng)基以1．05kg/cm2（15磅/英寸2）,121．3℃,20分鐘高壓蒸汽滅菌.如因特殊情況不能及時滅菌,則應(yīng)放入冰箱內(nèi)暫存.
9．?dāng)R置斜面
將滅菌的試管培養(yǎng)基冷至50℃左右,將試管棉塞端擱在玻棒上,擱置的斜面長度以不超過試管總長的一半為宜.
10．無菌檢查
將滅菌的培養(yǎng)基放入37℃的溫室中培養(yǎng)24—48小時,以檢查滅菌是否徹底.