PCR的全稱(chēng)是:多聚酶鏈反應(yīng),用俗話(huà)說(shuō)就是人為地制造一個(gè)環(huán)境,使雙鏈基因片段進(jìn)行復(fù)制、擴(kuò)增
目的基因:就是你想要擴(kuò)增的基因片段
變性:是在熱的環(huán)境下使雙鏈解鏈,一般需要94攝氏度
引物:引導(dǎo)復(fù)制的開(kāi)始,是一種RNA單鏈片段,能引導(dǎo)復(fù)制的起始位置
聚合酶:用的是Taq酶是在火山口找到的一種耐熱的酶,在它的作用下以四種脫氧核苷酸(dNTP)為原料合成雙鏈
延伸:通俗點(diǎn)說(shuō)就是原來(lái)的模板鏈和新合成的單鏈組成一條新的雙鏈的過(guò)程,延伸時(shí)間的長(zhǎng)短、溫度的高低會(huì)影響新雙鏈的質(zhì)量
PCR的大致過(guò)程
1、模板DNA
2、(第一輪循環(huán)):模板DNA變性和引物復(fù)性
3、(第一輪循環(huán)):引物延伸
4、(第二輪循環(huán)):新合成的雙鏈變性和引物復(fù)性
5、(第二輪循環(huán)):引物延伸
……
如此往復(fù),直至結(jié)束
之后可以泡個(gè)瓊脂糖電泳看看擴(kuò)增的情況,也可以測(cè)OD值,計(jì)算濃度
現(xiàn)在也有real time PCR,實(shí)時(shí)定量PCR,可以在間隔相等的時(shí)間測(cè)反應(yīng)物的濃度,獲得相對(duì)較準(zhǔn)確的數(shù)據(jù),比較簡(jiǎn)便.
總的來(lái)說(shuō),做分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)就是一項(xiàng)燒錢(qián)的活
什么是實(shí)時(shí)定量PCR?有什么作用?請(qǐng)用自己的話(huà)詳細(xì)說(shuō)明.
什么是實(shí)時(shí)定量PCR?有什么作用?請(qǐng)用自己的話(huà)詳細(xì)說(shuō)明.
其他人氣:891 ℃時(shí)間:2020-05-16 22:54:46
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