標(biāo)準(zhǔn)的PCR過程分為三步(如圖所示):
1.DNA變性(90℃-96℃):雙鏈DNA模板在熱作用下,
氫鍵斷裂,形成單鏈DNA
2.退火(復(fù)性)(40℃-65℃):系統(tǒng)溫度降低,引物與
DNA模板結(jié)合,形成局部雙鏈.
3.延伸(68℃-75℃):在Taq酶(在72℃左右最佳的活
性)的作用下,以dNTP為原料,從引物的5′端→3′ 端延
伸,合成與模板互補的DNA鏈.
每一循環(huán)經(jīng)過變性、退火和延伸,DNA含量既增加一倍.
現(xiàn)在有些PCR因為擴增區(qū)很短,即使Taq酶活性不是最佳也能在很短的時間內(nèi)復(fù)制完成,因此可以改為兩步法,即退火和延伸同時在60℃-65℃間進行,以減少一次升降溫過程,提高了反應(yīng)速度.
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