二硫鍵位置的確定
一般用蛋白酶水解帶有二硫鍵的蛋白質(zhì),從部分水解產(chǎn)物中分離出含二硫鍵的肽段,再拆開二硫鍵,將兩個肽段分別測序,再與整個多肽鏈比較,即可確定二硫鍵的位置.常用胃蛋白酶,因其專一性低,生成的肽段小,容易分離和鑒定,而且可在酸性條件下作用（pH2）,此時二硫鍵穩(wěn)定.肽段的分離可用對角線電泳,將混合物點到濾紙的中央,在pH6.5進(jìn)行第一次電泳,然后用過甲酸蒸汽斷裂二硫鍵,使含二硫鍵的肽段變成一對含半胱氨磺酸的肽段.將濾紙旋轉(zhuǎn)90度后在相同條件下進(jìn)行第二次電泳,多數(shù)肽段遷移率不變,處于對角線上,而含半胱氨磺酸的肽段因負(fù)電荷增加而偏離對角線.用茚三酮顯色,分離,測序,與多肽鏈比較,即可確定二硫鍵位置.
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還有一種方法,
蛋白質(zhì)中二硫鍵的定位及其質(zhì)譜分析