嵌套式 PCR第二步反應(yīng)無(wú)產(chǎn)物?
嵌套式 PCR第二步反應(yīng)無(wú)產(chǎn)物?
嵌套式PCR怎么稀釋第二部的產(chǎn)物?我試過(guò)2倍、10倍、20倍、30倍、40倍、50倍、100倍,都沒(méi)有條帶.第一次pcr有條帶,不過(guò)較淡.是用無(wú)菌水稀釋沒(méi)錯(cuò)吧?然后做為第二部的模板再次PCR?是用無(wú)菌水稀釋對(duì)么?我沒(méi)有做梯度和touch down.第一次是做16S,用通用引物,第二次是內(nèi)引物.文獻(xiàn)上用相同方法做出來(lái)的,我卻重復(fù)不出來(lái)溫度我用的就是按照文獻(xiàn)上的,是不是溫度太高了?需要做溫度梯度么?怎樣設(shè)計(jì)呢?
嵌套式PCR怎么稀釋第二部的產(chǎn)物?我試過(guò)2倍、10倍、20倍、30倍、40倍、50倍、100倍,都沒(méi)有條帶.第一次pcr有條帶,不過(guò)較淡.是用無(wú)菌水稀釋沒(méi)錯(cuò)吧?然后做為第二部的模板再次PCR?是用無(wú)菌水稀釋對(duì)么?我沒(méi)有做梯度和touch down.第一次是做16S,用通用引物,第二次是內(nèi)引物.文獻(xiàn)上用相同方法做出來(lái)的,我卻重復(fù)不出來(lái)溫度我用的就是按照文獻(xiàn)上的,是不是溫度太高了?需要做溫度梯度么?怎樣設(shè)計(jì)呢?
生物人氣：387 ℃時(shí)間：2020-05-19 14:17:20
優(yōu)質(zhì)解答
博凌科為-為你我做的時(shí)候直接取第一步的產(chǎn)物1~2ul來(lái)作為第二輪的模板,不過(guò)做了touch down.一直都沒(méi)問(wèn)題,條帶很清晰.
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