復(fù)蘇 平板劃線培養(yǎng) 挑單菌落 中試管擴(kuò)增 搖瓶擴(kuò)增
1.復(fù)蘇：根據(jù)所培養(yǎng)的細(xì)菌選擇適宜的培養(yǎng)基,大部分細(xì)菌在LB培養(yǎng)基中在超凈工作臺先用1毫升左右的適宜的培養(yǎng)基溶解冷凍菌,然后轉(zhuǎn)移到10毫升中試管（放入4毫升液體培養(yǎng)基）中,一般在37攝氏度搖床靜止或低轉(zhuǎn)速培養(yǎng)12小時或者過夜（溫度取決于所培養(yǎng)的細(xì)菌適宜生長的溫度）.
2.平板劃線培養(yǎng)：在平板（瓊脂+液體培養(yǎng)基）劃線,放37攝氏度培養(yǎng)箱培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng)6小時~12小時,在平板上觀察是否形成了單菌落.
3.挑單菌落：在超凈臺中挑選典型單菌落,置入10毫升中試管（內(nèi)有5毫升液體培養(yǎng)基）中,在37攝氏度搖床,轉(zhuǎn)速200轉(zhuǎn)培養(yǎng)12小時或者過夜,肉眼能看到試管渾濁.
3.按照1：20的比例將中試管中的菌液移到250毫升三角瓶（放入100毫升液體培養(yǎng)基）,培養(yǎng)條件同前.注意：所有的接種操作均需要在層流罩中,培養(yǎng)基應(yīng)無菌.