植物體細(xì)胞雜交的過程是怎樣的
植物體細(xì)胞雜交的過程是怎樣的
生物人氣:386 ℃時間:2020-06-02 12:38:36
優(yōu)質(zhì)解答
體細(xì)胞雜交是克服植物有性雜交不親和性、打破物種之間的生殖隔離、擴(kuò)大遺傳重組范圍的一種手段.操作過程包括:\x0d原生質(zhì)體制備、原生質(zhì)體融合、雜種細(xì)胞篩選、雜種細(xì)胞培養(yǎng)、雜種植株再生以及雜種植株鑒定等步驟.\x0d原生質(zhì)體制備是用纖維素酶、半纖維素酶和果膠酶將植物細(xì)胞壁分解掉,只留下細(xì)胞膜(質(zhì)膜)包裹著細(xì)胞內(nèi)含物.原生質(zhì)體融合是指兩個原生質(zhì)體的質(zhì)膜重新組合排列形成一個質(zhì)膜,其中含有兩個細(xì)胞核.在細(xì)胞工程中一般是誘導(dǎo)融合,形成的融合細(xì)胞中所含有的兩個細(xì)胞核是來自不同的物種,稱之為異核體(heterokaryon).誘導(dǎo)融合的手段有化學(xué)誘導(dǎo)和物理誘導(dǎo).在誘導(dǎo)因素的作用下形成的融合細(xì)胞進(jìn)一步產(chǎn)生核融合,進(jìn)行第一次有絲分裂.\x0d雜種細(xì)胞的篩選方法有:\x0d①細(xì)胞系互補(bǔ)的選擇方法,包括葉綠素缺失互補(bǔ)、營養(yǎng)缺陷互補(bǔ)和抗性互補(bǔ)等;\x0d②利用物理特異性差異的選擇方法:這是利用兩個原生質(zhì)體物理特異性差異的一種選擇,包括原生質(zhì)體的大小、顏色、浮密度等的不同來選擇;\x0d③利用生長特異性差異的選擇方法.需要注意的是上述選擇方法只適合部分雜交細(xì)胞的情況,有時無法選擇,就不加選擇地進(jìn)行培養(yǎng)和再生成植株,然后對再生植株的雜種性狀進(jìn)行鑒定.\x0d雜種細(xì)胞培養(yǎng)方法與原生質(zhì)體的培養(yǎng)方法相似.\x0d體細(xì)胞雜種的鑒定方法有:\x0d①形態(tài)學(xué)鑒定.利用雜種植株與雙親在表現(xiàn)型上的差異進(jìn)行比較分析,如葉片大小與形狀,花的形狀與顏色、葉脈、葉柄、花梗及表皮毛有無等;\x0d②細(xì)胞學(xué)鑒定.雜種植株細(xì)胞中的染色體數(shù)目是否比任何一方親本細(xì)胞中的染色體數(shù)目增多?理論上講如果染色體不丟失,雜種細(xì)胞中染色體數(shù)目應(yīng)為雙親染色體數(shù)目之和.也可以用基因組原位雜交的分子細(xì)胞學(xué)方法進(jìn)行鑒定;\x0d③同功酶鑒定.同功酶是功能相同的酶的多重分子形態(tài),它們是特異基因的產(chǎn)物.雜種細(xì)胞中的同功酶譜一般是雙親酶譜之和,但有時也會出現(xiàn)雙親沒有的新帶;\x0d④分子生物學(xué)鑒定.常用的方法有限制性片段長度多態(tài)性(RFLP)、隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性(RAPD)和擴(kuò)增片段長度多態(tài)性(AFLP)等.\x0d值得注意的是體細(xì)胞雜交尚存在一些問題:\x0d①親緣關(guān)系越遠(yuǎn),染色體排斥丟失的現(xiàn)象就越嚴(yán)重;\x0d②由于是兩個物種的全部遺傳物質(zhì)的合并,各種基因都在其中,選擇符合需要的個體難度大;\x0d③有時缺乏選擇雜種細(xì)胞的有效方法.因此目前整體對稱融合的工作比較少,而是采用非對稱融合,即一方親本包括了全部遺傳物質(zhì),另一方親本只取一部分遺傳物質(zhì),如用不具有核的原生質(zhì)體與之進(jìn)行融合.
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