熒光定量PCR引物為什么要跨內(nèi)含子設(shè)計,大家都說是為了避免提RNA時殘留基因組的干擾,但是即使跨了內(nèi)含子,假如有基因組殘留,Real time PCR中還是能P出比cDNA大的一條帶（含內(nèi)含子的條帶）,探針同樣會結(jié)合這條大的片段,不會只結(jié)合
熒光定量PCR引物為什么要跨內(nèi)含子設(shè)計,大家都說是為了避免提RNA時殘留基因組的干擾,但是即使跨了內(nèi)含子,假如有基因組殘留,Real time PCR中還是能P出比cDNA大的一條帶（含內(nèi)含子的條帶）,探針同樣會結(jié)合這條大的片段,不會只結(jié)合小的片段,還是會干擾定量,除非引物只能擴增cDNA,不能擴增基因組,那就不存在基因組的干擾了.很困惑,請各位指教.
生物人氣：963 ℃時間：2020-02-05 19:35:44
優(yōu)質(zhì)解答
引物若跨內(nèi)含子的話,引物僅能以3'端的一小部分結(jié)合基因組DNA,這樣的話Tm會很低.在較高的退火溫度下,引物幾乎無法和基因組DNA結(jié)合來引發(fā)聚合,而主要是與能夠完全配對的cDNA結(jié)合并引發(fā)反應(yīng).
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