CHO細(xì)胞血清培養(yǎng)
傳統(tǒng)上CHO細(xì)胞的培養(yǎng)都是在DMEM／F12基礎(chǔ)培養(yǎng)基中添加5~10的小牛血清(用于重組蛋白)或胎牛血清(用于雜交瘤生產(chǎn))單抗來完成的,血清除了供給細(xì)胞的營養(yǎng)成分外,還能促進(jìn)細(xì)胞開始合成DNA,對(duì)細(xì)胞的增殖有很大的作用.實(shí)驗(yàn)證明,血清在細(xì)胞的體外培養(yǎng)中提供了細(xì)胞增殖所必需的生長因子.但哺乳動(dòng)物的血清價(jià)格昂貴,成本高不適于今天的大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn).而且哺乳動(dòng)物血清作為補(bǔ)加物,存在許多問題,首先血清的來源存在問題,血清來源于特定的地區(qū),因而如果該地區(qū)發(fā)生災(zāi)荒或牛群中流行疾病,都可導(dǎo)致血清失去供應(yīng)源.血清批量之間的差異大,重復(fù)性差,由于血清來源于動(dòng)物,動(dòng)物個(gè)體或群體的差異及時(shí)間上的差異都能導(dǎo)致每個(gè)批號(hào)的血清不完全一樣.
從重組蛋白生產(chǎn)的角度來看,出于Q和Qc的要求,每換一個(gè)批號(hào)的血清,都包含大量的驗(yàn)證工作,這就給生產(chǎn)帶來很大的麻煩.另外血清來源于動(dòng)物因此經(jīng)常被污染,污染的血清往往導(dǎo)致細(xì)胞生長緩慢,蛋白產(chǎn)量下降,甚至導(dǎo)致細(xì)胞死亡.目前購自各大公司的血清雖能消滅細(xì)菌和所有支原體,但很難保證除去所有的病毒污染.血清的成分十分復(fù)雜,經(jīng)研究表明,血清除含有促進(jìn)生長的活性成分外,還含有一定的細(xì)胞毒性物質(zhì)和抑制物質(zhì),對(duì)細(xì)胞有去分化作用,影響細(xì)胞功能的表達(dá) 血清復(fù)雜的成分也給基因工程表達(dá)產(chǎn)物的下游工作帶來很大的困難,因此成分明確,價(jià)格經(jīng)濟(jì)的無血清培養(yǎng)基成為CHO細(xì)胞培養(yǎng)的一種必然需求.